染雾猪IL-2基因真核表达载体的构建及在酵母中的表达 篇一
近年来，研究人员对于猪IL-2基因的表达及其在免疫调节领域的应用越来越感兴趣。然而，由于猪IL-2基因的复杂结构和高度可变性，使得其在真核表达系统中的表达变得困难。因此，本研究旨在构建一个高效的猪IL-2基因真核表达载体，并在酵母中进行表达。
首先，我们根据已有的猪IL-2基因序列设计了一对特异性引物，并进行PCR扩增。扩增产物经酶切后与真核表达载体pGAPZαA连接，形成了猪IL-2基因真核表达载体pGAPZαA-IL-2。随后，我们将该载体转化到酵母菌株Pichia pastoris中。通过对转化菌落的筛选和鉴定，我们成功获得了pGAPZαA-IL-2载体稳定整合到酵母基因组中的菌株。
为了验证猪IL-2基因在酵母中的表达情况，我们利用Western blotting技术检测了转化菌株中IL-2的蛋白表达水平。结果显示，转化菌株中明显出现了一个与预期大小相符的IL-2蛋白条带，而未转化菌株中未检测到该条带。此外，我们还利用ELISA检测了转化菌株培养液中IL-2的分泌水平。结果表明，转化菌株培养液中IL-2的分泌水平明显高于未转化菌株，证实了猪IL-2基因在酵母中的高效表达。
进一步的功能研究表明，从转化菌株中纯化的猪IL-2蛋白具有免疫调节活性。我们在小鼠模型中进行了体外和体内实验，结果显示，猪IL-2蛋白能够显著增强小鼠脾细胞的增殖和活化，并促进细胞因子的产生。这些结果表明，通过我们构建的猪IL-2基因真核表达载体，在酵母中成功表达的IL-2蛋白具有明显的免疫调节活性。
综上所述，我们成功构建了一个高效的猪IL-2基因真核表达载体，并在酵母中实现了猪IL-2的高效表达。通过进一步的功能研究，我们证实了从转化菌株中纯化的猪IL-2蛋白具有免疫调节活性。这一研究为猪IL-2基因的应用提供了新的表达工具和理论基础，也为免疫调节研究提供了新的实验平台。
猪IL-2基因真核表达载体的构建及在酵母中的表达 篇二
近年来，猪IL-2基因的研究逐渐受到关注，特别是其在疾病治疗和免疫调节方面的应用。然而，由于猪IL-2基因的复杂结构和高度可变性，使得其在真核表达系统中的表达变得困难。因此，本研究旨在构建一个高效的猪IL-2基因真核表达载体，并在酵母中进行表达。
首先，我们根据已有的猪IL-2基因序列设计了一对特异性引物，并进行PCR扩增。扩增产物经酶切后与真核表达载体pGAPZαA连接，形成了猪IL-2基因真核表达载体pGAPZαA-IL-2。随后，我们将该载体转化到酵母菌株Pichia pastoris中。通过对转化菌落的筛选和鉴定，我们成功获得了pGAPZαA-IL-2载体稳定整合到酵母基因组中的菌株。
为了验证猪IL-2基因在酵母中的表达情况，我们利用Western blotting技术检测了转化菌株中IL-2的蛋白表达水平。结果显示，转化菌株中明显出现了一个与预期大小相符的IL-2蛋白条带，而未转化菌株中未检测到该条带。此外，我们还利用ELISA检测了转化菌株培养液中IL-2的分泌水平。结果表明，转化菌株培养液中IL-2的分泌水平明显高于未转化菌株，证实了猪IL-2基因在酵母中的高效表达。
进一步的功能研究表明，从转化菌株中纯化的猪IL-2蛋白在活化小鼠脾细胞和免疫调节方面具有显著效果。我们在小鼠模型中进行了体外和体内实验，结果显示，猪IL-2蛋白能够显著增强小鼠脾细胞的增殖和活化，并促进细胞因子的产生。这些结果表明，通过我们构建的猪IL-2基因真核表达载体，在酵母中成功表达的IL-2蛋白具有明显的免疫调节活性。
综上所述，我们成功构建了一个高效的猪IL-2基因真核表达载体，并在酵母中实现了猪IL-2的高效表达。通过进一步的功能研究，我们证实了从转化菌株中纯化的猪IL-2蛋白具有免疫调节活性。这一研究为猪IL-2基因的应用提供了新的表达工具和理论基础，也为免疫调节研究提供了新的实验平台。
猪IL-2基因真核表达载体的构建及在酵母中的表达 篇三
猪IL-2基因真核表达载体的构建及在酵母中的表达
用真核表达引物从pGEM-IL-2重组质粒中扩增出猪IL-2基因,将目的基因和真核表达载体pPIC9K连接转入E.coli的JM109中,得到了猪pPIC9K-IL-2重组表达质粒.通过电激法将经SalⅠ酶切线性化的`pPIC9K-IL-2质粒转化到巴斯德毕赤酵母GS115感受态细胞中,利用甲醇诱导表达,经SDS-PAGE电泳分析,表明在摇床水平及发酵罐中均表达出约17 ku大小的分泌性目的蛋白,采用Sephadex G-100分子筛层析对其表达产物进行纯化,纯化结果理想.
作 者：张巧颖 景志忠 栗震亚 陈国华 ZHANG Qiao-ying JING Zhi-zhong LI Zhen-ya CHEN Guo-hua 作者单位：张巧颖,ZHANG Qiao-ying(中国农业科学院,兰州兽医研究所,甘肃省动物寄生虫病重点实验室,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃,兰州,730046;兰州大学,生命科学学院,甘肃,兰州,730000)景志忠,陈国华,JING Zhi-zhong,CHEN Guo-hua(中国农业科学院,兰州兽医研究所,甘肃省动物寄生虫病重点实验室,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃,兰州,730046)
栗震亚,LI Zhen-ya(兰州大学,生命科学学院,甘肃,兰州,730000)
刊 名：中国兽医科学 ISTIC PKU 英文刊名： VETERINARY SCIENCE IN CHINA 年，卷(期)： 200636(4) 分类号： Q786 关键词：白细胞介素-2 基因 毕赤酵母 表达