染雾乳链菌肽前体基因nisZ在乳酸乳球菌中的克隆和表达 篇一
标题：乳链菌肽前体基因nisZ在乳酸乳球菌中的克隆和表达
摘要：乳链菌肽是一类具有抗菌活性的小分子肽，能够在乳酸乳球菌中产生。本研究旨在通过克隆和表达乳链菌肽前体基因nisZ，进一步探究其在乳酸乳球菌中的功能和应用潜力。通过PCR扩增和限制性内切酶切割，成功克隆得到nisZ基因片段，并将其插入表达载体pUC19中，最后在大肠杆菌中进行转化和表达。通过SDS-PAGE和Western blot分析，确定乳链菌肽前体基因nisZ在乳酸乳球菌中成功表达。该研究结果为进一步研究乳链菌肽的功能和应用提供了基础。
关键词：乳链菌肽前体基因nisZ；乳酸乳球菌；克隆；表达
引言：乳链菌肽是一类由乳酸乳球菌产生的抗菌活性小分子肽，具有广谱抗菌活性和低毒性的特点。乳链菌肽通过破坏细菌细胞膜的完整性，抑制细菌的生长和繁殖。乳链菌肽前体基因nisZ编码了乳链菌肽的前体蛋白，是乳酸乳球菌产生乳链菌肽的关键基因。因此，克隆和表达乳链菌肽前体基因nisZ对于进一步研究乳链菌肽的功能和应用具有重要意义。
材料与方法：本实验使用乳酸乳球菌X作为实验材料，利用PCR技术从乳酸乳球菌X基因组中扩增乳链菌肽前体基因nisZ的片段。扩增产物经限制性内切酶切割，然后与表达载体pUC19连接，形成重组质粒pUC19-nisZ。将重组质粒转化到大肠杆菌DH5α中，通过筛选获得重组菌株。经PCR和限制性内切酶鉴定，确定重组质粒中nisZ基因的插入方向和正确性。最后，通过IPTG诱导表达，利用SDS-PAGE和Western blot分析检测乳链菌肽前体基因nisZ的表达情况。
结果：通过PCR扩增和限制性内切酶切割，成功获得了乳链菌肽前体基因nisZ的片段，并插入到表达载体pUC19中。经PCR和限制性内切酶鉴定，确认了重组质粒pUC19-nisZ中nisZ基因的插入方向和正确性。将重组质粒转化到大肠杆菌DH5α中，经筛选得到重组菌株。通过IPTG诱导表达，成功获得了乳链菌肽前体基因nisZ在大肠杆菌中的表达产物。通过SDS-PAGE和Western blot分析，确定了乳链菌肽前体基因nisZ在乳酸乳球菌中的表达情况。
讨论与结论：本研究成功克隆并表达了乳链菌肽前体基因nisZ，为进一步研究乳链菌肽的功能和应用提供了基础。通过对乳链菌肽前体基因nisZ在乳酸乳球菌中的克隆和表达研究，为进一步揭示乳链菌肽的合成机制、优化表达条件以及开发新型抗菌药物等方面提供了理论基础和实验依据。
参考文献：
1. Zhang M, et al. Cloning and characterization of nisin Z gene from Lactococcus lactis. Wei Sheng Wu Xue Bao. 2002;42(2):193-8.
2. Liu W, et al. Expression and purification of recombinant nisin precursor peptide in Escherichia coli. J Microbiol Biotechnol. 2012;22(9):1253-8.
乳链菌肽前体基因nisZ在乳酸乳球菌中的克隆和表达 篇三
乳链菌肽前体基因（nisZ）在乳酸乳球菌中的克隆和表达
用PCR技术从克隆有完整乳链菌肽生物合成基因簇（来自于乳链菌肽高产菌株L.LactisAL2）的重组噬菌体λHJ-3中扩增了编码乳链菌肽的前体基因，与pMG36e连接得到重组质粒pHJ201，用电击转化法将pHJ201转化到L.Lactis NZ9800中，经活性测定和Tricine-SDS-AGE电泳证实乳链菌肽前体基因获得了功能表达。DNA序列分析表明乳链菌肽高产菌株L.l
